作者：顾珊珊; 张寒莹; 朱嗣文; 吴飞; 金拓静电纺丝蛋白缓释血管内皮生长因子血管再生
摘要：细胞因子蛋白复杂脆弱的高级构象极易因组织工程支架制备过程中的苛刻条件变性而失活,甚至引起有害的抗体反应。目前有关组织工程支架材料的研究方法尚未实现以天然构象长期缓释细胞因子蛋白。针对这个难题,本研究运用水相-水相冷冻相分离蛋白颗粒制备法,将蛋白药物血管内皮生长因子（VEGF165）保护性载入葡聚糖纳米颗粒中,进而将载有蛋白的多糖颗粒混悬于作为缓释基质的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）中,通过高压静电纺丝,制得长效缓释VEGF165的组织工程纤维膜。一系列物理化学表征,包括扫描电镜（SEM）、接触角、强度试验等,表明上述方法制得了表面形态与机械强度较理想的组织工程纤维。对制备过程中各个阶段的蛋白进行回收,并采用CCK-8法进行活性检测证明VEGF_（165）的生物活性在多糖颗粒制备阶段保持在97%以上,在最终的组织工程纤维膜阶段保持在87%以上,远大于w/o型乳液法制备得到的纤维（低于55%）。体外试验证明颗粒复合纤维能抑制蛋白突释且达到长效缓释效果,蛋白在初始5 d内的释放总量不到35%,到25 d时释放量超过92%。而w/o型乳液法制得的纤维在初始5 d内的释放总量超过53.12%,到25 d时释放量为84.52%。最后将纤维膜植入下肢缺血的大鼠体内,进行免疫组化观察,结果表明颗粒复合PLGA纤维的再生血管数量明显高于w/o型乳液法制备得到的纤维。
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