作者：路攀; 徐秋琴; 丁粤粤; 钱为国; 黎璇; 陈...线粒体功能障碍血管内皮细胞损伤nfat1nfat2
摘要：目的 观察肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的离体血管内皮细胞损伤后线粒体功能、过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）、活化T细胞核因子1（NFAT1）、活化T细胞核因子2（NFAT2）的变化.方法 （1）不同浓度的TNF-α（10、20、40、80 ng/mL）刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）12、24、36 h制备不同程度的血管内皮细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞活性、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,倒置光学显微镜下观察细胞形态,以此确定模型是否建立成功.（2）采用Jc-1免疫荧光染色结合荧光显微镜检测线粒体膜电位,MitoSOX？Red染色结合荧光显微镜检测线粒体活性氧（mtROS）.（3）采用RT-qPCR、Western blot方法分别检测PGC-1α、NFAT1、NFAT2 mRNA及蛋白水平.结果 （1）随着TNF-α刺激浓度及作用时间的增加,HUVECs活性逐渐下降,在浓度为40 ng/mL,刺激时间为24 h,细胞活性下降约49％,接近TNF-α诱导HUVECs损伤的IC50,差异有统计学意义（P〈0.05）.20、40、80 ng/mL TNF-α刺激HUVECs 24 h后,细胞凋亡率逐渐升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）.（2）随着血管内皮细胞损伤程度的增加,线粒体膜电位逐渐下降,mtROS逐渐升高（均P〈0.05）.（3）PGC-1αmRNA及蛋白表达水平逐渐下降,核转录因子NFAT1、NFAT2 mRNA及蛋白表达水平逐渐升高（均P〈0.05）.结论 随着血管内皮细胞损伤程度的增加,线粒体功能障碍逐渐加剧,NFAT表达量逐渐增加.
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