作者：周洲; 李良平; 高采平; 钟应佳; 翟祎星; ...循环肿瘤细胞免疫磁珠法显微操作
摘要：目的建立有效获取肿瘤患者外周血中单个循环肿瘤细胞（CTC）的方法。方法预先将经DiI染色的SW480 细胞混入健康成人的抗凝全血中，分别单独采用密度梯度离心（OncoQuick）、淋巴细胞分离术（Ficoll）、“玫瑰花富集”（RosetteSep）、免疫磁珠（CELLection）及淋巴细胞分离术联合免疫磁珠联用（Ficoll＋CELLection）富集这些肿瘤细胞，统计回收率并观察纯度以进行比较。再使用显微操作仪捕获单个NCI-H460、HCT-116、DLD-1、SW480、TF-1 等探测细胞及从肝癌患者外周血中富集获得的CTC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术分析单细胞的CD45 mRNA 表达水平。结果5 组方法的肿瘤细胞回收率分别为（52.5±3.5）%、（46.6±1.9）%、（36.9±5.5）%、（14.1±3.1）%和（8.8±1.4）%；单因素方差分析表明，5 组方法回收率比较差异有统计学意义（P〈0.05）；SNK-q 检验表明，除OncoQuick 组和Ficoll 组（P〉0.05）、CELLection组和Ficoll＋CELLection 组（ P〉0.05）外，其他各组之间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。在荧光显微镜下观察富集的肿瘤细胞，发现CELLection 组及Ficoll＋CELLection组的纯度更高。qRT-PCR结果显示，总循环数60，GAPDH Ct 均值为（29.94±0.59），除了单个TF-1 细胞的CD45 Ct 均值为（34.21±0.22），其他单个探测细胞及CTC 的CD45 均无表达。结论CELLection 即免疫磁珠法配合显微操作能有效获取肝癌患者外周血中的单个CTC 并保留其原始的分子特性，适用于后续单细胞分析与研究。该方法为CTC 运用于剖析肿瘤分子的特征、评价靶向治疗药物的药效以及监控肿瘤的复发与转移等临床问题奠定了基础。
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