作者：程龙飞; 林群群; 刘荣昌; 陈翠腾; 傅秋玲...多杀性巴氏杆菌外膜蛋白a原核表达elisa
摘要：为建立基于重组外膜蛋白A的检测禽源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法，扩增去除信号肽的外膜蛋白A（outer membrane proteinA，0mpA）基因，定向克隆到栽体pET32a，构建重组表达质粒pET32a-PmOmpA，转化至Escherichiacoli BL21（DE3）以IPTG进行诱导，通过镍离子亲和层析纯化重组蛋白，进行SDS—PAGE和Western—blotting分析。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法，方阵滴定法确定其最佳包被浓度和血清的最佳稀释度。结果，重组蛋白能与阳性血清发生良好的免疫反应。重组蛋白的包被浓度为4mg／L，血清的最佳稀释度为1：80。SPF鸡的新城疫、鸡白痢和大肠杆菌病阳性血清，隔离饲养的番鸭鸭瘟、鸭病毒性肝炎和鸭疫里默氏菌病阳性血清，用该方法检测均为阴性。板内变异系数和板间变异系数均小于10％。ELISA方法的敏感性比直接凝集试验高出80倍以上。以重组外膜蛋白A建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性，可以用于禽霍乱感染性抗体的检测，也可用于禽霍乱灭活苗和荚膜疫苗免疫效果的检测。
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