作者：王云龙; 赵二霞; 李玉林重组菌tk1表达条件优化亲和层析单克隆抗体
摘要：为获得具有免疫原性的TK1重组蛋白。通过构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32a-TK1,采用大肠杆菌pET32a表达系统,优化IPTG浓度、诱导温度、诱导时间使BL21-pET32a-TK1重组菌表达目的蛋白的作用条件最佳。表达产物用镍离子亲和层析纯化获得TK1蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot进行检测。用TK1重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,检测蛋白质免疫原性。实验结果表明,成功构建能够表达TK1蛋白的重组菌BL21-pET32aTK1,在37℃条件下,IPTG浓度为0.2mmol/L、诱导6h时重组蛋白TK1表达量最高。镍离子亲和层析梯度洗脱在80mmol/L咪唑条件下TK1蛋白纯度最大,灰度分析为87.3%,浓缩后蛋白质浓度为5.96mg/ml。用该蛋白质制备杂交瘤共获得10株稳定分泌TK1抗体的阳性单克隆细胞株,表明TK1重组蛋白具有较好的免疫原性。成功获得可溶性、抗原活性高、免疫原性强的TK1重组蛋白,为肿瘤科学及临床应用研究提供物质支撑。
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