作者：韦传宝; 邓辉烟草花叶病毒生姜elisa方法
摘要：目的：建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法。方法：用RT-PCR方法检测侵染生姜的烟草花叶病毒,挑选仅含烟草花叶病毒的生姜叶片,采用离心方法提取叶片中的烟草花叶病毒,通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳分离出烟草花叶病毒的外壳蛋白CP,将含CP的聚丙烯酰胺凝胶磨细后免疫小鼠,获得抗血清。用Western blot检测抗血清特异性,ELISA检测抗血清的结合性,通过亲和层析纯化抗血清中的Ig G。以待测生姜叶片液为抗原包被,纯化的抗血清IgG为一抗,羊抗小鼠IgG为二抗,建立检测侵染生姜的烟草花叶病毒的间接ELISA。结果：抗血清中的Ig G仅仅与烟草花叶病毒的CP结合,并能够结合天然烟草花叶病毒颗粒。建立的ELISA对花叶病生姜叶片的检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论：成功地建立了检测侵染生姜的烟草花叶病毒的ELISA方法。
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