作者：李永超; 朱瑞; 徐龙发; 巫洋涛; 赵欢; 吴...乙肝病毒核心蛋白肠道病毒71型非结构蛋白3d单克隆抗体
摘要：目的：预测肠道病毒71型（EV71）非结构蛋白3D的表位,以HBc蛋白为载体展示多肽,制备并鉴定抗EV71-3D的特异性单克隆抗体（m Ab）。方法：应用生物信息学方法分析预测出EV71 3D蛋白亲水性和免疫原性指数较高的多肽片段,并运用HBc颗粒型蛋白载体展示肽段,构建多肽融合蛋白,免疫BALB/c雌鼠,通过杂交瘤技术和亲和层析技术制备和纯化抗EV71-3D蛋白的特异性m Ab,用间接ELISA、ELISPOT、IFA和IHC对m Ab的性质进行初步鉴定。结果：构建表达分别嵌合3D蛋白34～43位氨基酸残基、61～76位氨基酸残基、151～164位氨基酸残基的HBc重组蛋白,免疫并经过多轮克隆化筛选,获得抗EV71-3D单克隆抗体3E1,其亚类为Ig G2a;免疫荧光试验、ELISPOT法和免疫组织化学染色结果显示其可与EV71特异性结合。结论：成功制备可特异性识别EV71的单克隆抗体3E1,为病毒的检测及进一步研究3D蛋白的功能奠定了基础,同时还验证了生物信息学技术与HBc颗粒型载体展示多肽技术相结合可快速高效地制备单克隆抗体。
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