作者：孙立伟 姜锐app真核表达载体阿尔茨海默病
摘要：目的构建淀粉样前体蛋白（APP）基因真核表达载体,转染SH-SY5Y细胞,建立稳定转染细胞系。方法从质粒pcDNAs-APP中经PCR扩增出APP基因,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染SH-SY5Y细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,通过印迹法（Western blot）检测APP的表达。结果 pcDNA3.1（＋）-APP重组体经PCR扩增后片段大小约为2 300 bp,与预期相同。测序结果与目的序列相同,重组体载体构建成功。Western印迹检测到SH-SY5Y细胞中APP的表达。结论成功构建pcDNA3.1（＋）-APP真核表达载体并稳定转染SH-SY5Y细胞,成功表达了目的基因,为进一步研究阿尔茨海默病分子学机制奠定了基础。
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