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前列腺癌特异突变DNA聚合酶β真核表达载体构建及鉴定

作者:王明臣 宋宇 张善锋 付蕾 文明 赵勤 金国...前列腺癌基因突变真核表达载体

摘要:目的构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体。方法提取有特异DNA polβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型DNA polβ全基因;构建T—A克隆并进行重组体的筛选鉴定;亚克隆入表达载体pcDNA3.1并进行重组体的筛选和鉴定。结果PCa特异突变DNA polβ基因扩增选择出P4(Ml—polβ)和PS(M2-polβ)两个标本,构建重组有特定突变位点的polβ目的基因的pcDNA3.1真核表达载体,经PCR扩增获得2个阳性集落。结论经鉴定成功构建2例PCa特异突变DNA polβ真核表达载体(pcDNA3.1-M1 and pcDNA3.1-M2)。

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