作者：郭茂娟 姜希娟 马东明 范英昌骨髓间充质干细胞诱导分化丹酚酸b
摘要：目的观察乳鼠心肌细胞条件培养液、SalB、5-氮胞苷（5-aza）及SalB联合5-aza体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为心肌样细胞的作用及其机制。方法分离培养及鉴定大鼠MSCs,培养乳鼠心肌细胞,收集条件培养液对其进行分组诱导：①SalB（终浓度为250μg/L）,②5-aza组（终浓度为10μg/L）,③SalB联合5-aza组（终浓度分别为250μg/L与10μmol/L）,④乳鼠心肌细胞条件培养液,⑤未加诱导剂的阴性对照组。选取MSCs进行诱导,诱导周期为4w。倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况及形态变化,免疫细胞化学法鉴定心肌特异性肌钙蛋白T（cTnT）表达,实时荧光定量RT-PCR法检测心肌早期基因NKX2.5、GATA-4 mRNA的相对表达量。结果细胞形态学显示,诱导后的MSCs体积增大,增殖减慢,并出现肌管样结构;免疫细胞化学结果显示,诱导后的MSCs表达心肌特异性蛋白cTnT,与5-aza组相比,SalB组和条件培养液两组蛋白表达较低,SalB联合5-aza组蛋白表达升高;实时荧光定量RT-PCR结果显示除阴性对照组外,其他四组表达心肌分化早期基因,SalB联合5-aza组诱导后的MSCs的心肌早期分化基因表达明显高于其他三组。结论SalB联合5-aza诱导MSCs表达心肌特异性肌钙蛋白cTnT;上调心肌早期基因NKX2.5、GATA-4mRNA的表达,证实其能够向心肌细胞分化能力;条件培养液不能上调心肌细胞的早期基因和蛋白,不能诱导其分化。
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