作者：徐煌 韩冬 董波 关铭 颜炜群基因表达毕赤酵母
摘要：目的用毕赤酵母表达体系制备具有与天然HER2／neu ICD相同结构和活性的重组HER2／neuICD。方法PCR法自质粒pCMV中克隆HER2／neuICD基因，构建真核表达载体pPICZα／HER2／neu ICD，电转化至毕赤酵母菌株X-33。对基因转染Zeocin抗性阳性的克隆，采用PCR法筛选出稳定表达HER2／neuICD的菌株。最后用SDS-PAGE鉴定甲醇诱导的培养上清液中的HER2／neuICD。结果构建pPICZα／HER2／neu ICD真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆；PCR法筛选了稳定表达HER2／neu ICD的菌株；SDS-PAGE分析显示甲醇诱导后表达上清中含有HER2／neu ICD，分子量约为84kDa。结论成功构建pPICZα／HER2／neuICD真核表达载体并筛选出稳定表达HER2／neuICD的毕赤酵母工程菌。
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