作者：张绍昆 刘一 孙绍华 付长峰 赵松 闫明绿色荧光蛋白成纤维细胞
摘要：目的构建和鉴定含有标记基因绿色荧光蛋白（GFP）的人胰岛素样生长因子-1（hIGF-1）基因真核表达载体,为基因治疗关节软骨缺损奠定基础。方法利用基因重组技术将GFP cDNA连接至pcDNA3.1-IGF-1中,构建真核表达载体pcGI,然后限制性内切酶酶切鉴定。将pcGI转染成纤维细胞,经G418筛选,荧光显微镜、原位杂交和免疫细胞化学检测GFP和hIGF-1的表达,流式细胞仪检测细胞周期。结果酶切分析证明重组的pcGI质粒含有GFP cDNA和hIGF-1 cDNA碱基片段,方向及大小正确。转染后的成纤维细胞,荧光显微镜观察可激发出绿色荧光,原位杂交和免疫细胞化学检测有hIGF-1的表达。流式细胞仪分析显示转染后成纤维细胞S期细胞增加,G1期细胞减少（P〈0.01）。结论含有GFP和hIGF-1基因的真核表达载体pcGI其可以在成纤维细胞内获得稳定表达,并有效的促进成纤维细胞的增殖,这为进一步开展IGF-1基因治疗软骨损伤修复的研究奠定了基础。
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