作者：韩冬 徐煌 孔宁 张婷 颜炜群 关铭ecd基因表达毕赤酵母
摘要：目的在毕赤酵母中高效表达HER2／neu胞外区，制备具有与天然HER2／neu相同结构和生物学活性的重组人HER2／neu胞外区（rhHER2／neu ECD）。方法用RT-PCB法自人mBNA中克隆her2／neu ECD基因，构建真核表达载体pPICZα/her2/neu ECD。经核酸测序确证后，电转化毕赤酵母菌株X-33。用PCB法筛选基因转染后Zeocin抗性阳性的克隆，用SDS-PAGE法筛选高表达HER2／neu ECD工程菌，用Western印迹法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的HER2／neu ECD。结果经BT-PCB法克隆的her2／neu ECD基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致。将her2／neu ECD基因定向插入pPICZα，构建pPICZα/her2/neu ECD真核表达载体，经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆。SDS-PAGE和Western印迹法分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HER2／neu ECD，分子量110kDa。HER2／neu ECD表达量达120mg／L。结论克隆her2／neu ECD基因并构建和筛选出高效表达HER2／neu ECD的毕赤酵母工程菌。
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