作者：杜建时; 赵晴; 张英丽; 陈珂骨髓间充质干细胞基因转染
摘要：目的 结合骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子（VEGF）的优点,探讨VEGF对其体外诱导分化的作用。为缺血性疾病的治疗提供新思路。方法 成人新鲜骨髓,Percoll梯度分离法培养,单克隆培养法分离传代扩增骨髓基质细胞（MSCs）。在大肠杆菌DH5α中扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒。脂质体法转染MSCs。流式细胞术检测诱导前后MSCs免疫表型变化。一抗VEGF和CD31（1∶50）,FITC标记的VEGF二抗和cy3标记的CD31二抗与细胞共同孵育,甘油封片,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞染色情况。结果 转染前表达CD44（75.86%）、CD31（5.63%）。转染后CD44表达明显下调（40.18%）,CD31则明显上调（56.20%）。FITC标记后VEGF抗体使细胞显现绿色荧光,cy3标记的CD31抗体使细胞显红色荧光。结论 转染VEGF后骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化且有分泌VEGF的功能,为干细胞植入及血管再生起到指导作用。
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