作者：耿义群; 傅玉才; 徐小虎; 王伟; 许锦阶大鼠sirt1基因表达重组蛋白
摘要：目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
