作者：杨宇; 吴江; 杨欣; 孙欣; 吴昊; 王全颖; ...nap慢病毒基因治疗人神经母细胞瘤细胞
摘要：目的 构建分泌表达神经保护短肽NAP的重组慢病毒载体，观察重组慢病毒对APPsw转基因人神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH）的保护作用。方法 采用PCR方法克隆融合基因NT4-NAP cDNA；磷酸钙沉淀法包装重组慢病毒Lent/NT4-NAP；平行包装含有报告基因EGFP的报告病毒；SK-N-SH细胞分为正常对照组、单纯APPsw转基因组、空慢病毒载体＋APPsw转基因组和NT4-NAP慢病毒＋APPsw转基因组，在倒置相差显微镜下观察形态学改变；MTT检测细胞增殖活力；Annexin V／PI法流式细胞术检测各组细胞凋亡和坏死情况。结果 基因测序证明克隆的NT4-NAP cDNA与实验设计完全一致；FACS检测重组病毒滴度为2×10^6 U／L；单纯APPsw转基因组，大量细胞出现凋亡及坏死（与正常对照组比较P〈0．01）；NT4-NAP慢病毒＋APPsw转基因组的细胞数量和活力明显较单纯APPsw转基因细胞改善（P〈0．01）；FACS检测无论凋亡还是坏死细胞的比率保护组都明显低于加害组（P〈0．01）。结论 成功构建了能够分泌表达NAP的重组慢病毒载体；重组病毒能够高效转染人神经母细胞瘤细胞；重组病毒表达的蛋白能对AD细胞模型起到很好的保护作用。
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