德国小蠊变应原Blag2单克隆抗体的制备与鉴定

作者：张浩; 马文静; 何韶衡德国小蠊blag2单克隆抗体蛋白质印迹

摘要：目的制备德国小蠊（Blattella germanical变应原Blag2的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法以纯化的0．2mg／mlBlag2蛋白溶液为抗原免疫雌性BLAB／c小鼠6只，免疫4次，每次间隔1周。免疫后第5天取小鼠尾静脉血，制备小鼠血清，第6天加强免疫1次，第7天处死小鼠取脾脏，制备脾细胞悬液。测定小鼠抗血清滴度．运用杂交瘤技术将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合．采用有限稀释法对阳性孔杂交瘤细胞进行克隆化。蛋白质印迹（Westernblotting）检测单克隆抗体特异性，间接ELISA测定单克隆抗体效价，双抗夹心ELISA鉴定单克隆抗体的亚型。结果在小鼠血清稀释至1：16000时A450值仍〉0．100，判断为免疫成功。通过杂交瘤技术获得2株能稳定分泌Blag2单克隆抗体的杂交瘤细胞，标记为Blag2—1、Blag2—2。Westernblotting结果表明．B1ag2—1和B1ag2-2单克隆抗体对Blag2蛋白均具有高度特异性。间接ELISA测得2株单克隆抗体的效价分别为B1ag2．1（1：16000）、B1ag2-2（1：8000）。双抗夹心EUSA结果表明单克隆抗体蛋白亚类均为免疫球蛋白G1（IgG1）。结论制备的德国小蠊变应原单克隆抗体B1ag2能与Blag2蛋白发生特异性结合。

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