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毛首鞭形线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂TtSerpinl对蛋白酶的抑制作用

作者:司徒永立; 邵正; 邓莉; 隋细香; 李海舰; ...毛首鞭形线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达组织蛋白酶g中性粒细胞弹性蛋白酶蛋白酶3

摘要:目的原核表达、分离纯化毛首鞭形线虫(Trichuris trichiura)丝氨酸蛋白酶抑制剂1(TtSer-pinl),并观察其对蛋白酶的抑制作用。方法从毛首鞭形线虫成虫cDNA中扩增TtSerpinl编码序列(GenBank登录号为MF401634),将其连接入原核表达载体,构建重组质粒pET32a-suno/TtSerpin1。将重组质粒转化人大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,用异丙基.B—D.硫代半乳糖苷诱导TtSerpinl融合蛋白表达。表达的包涵体蛋白经变性、复性、镍亲和层析纯化、SUMO蛋白酶酶切融合标签后获得rTtSerpin1。用发色底物法检测其对人组织蛋白酶G、中性粒细胞弹性蛋白酶、蛋白酶3、纤溶酶和胰蛋白酶,猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶及牛α-胰糜蛋白酶的抑制作用。结果成功构建了重组质粒pET32a—sumo/TtSerpinl.并在E.coli中成功表达。表达产物主要为包涵体.复性、纯化后的rTtSerpinl具有较好的蛋白酶抑制活性。1000nmol/L的rTtSerpinl对人组织蛋白酶G(100nmd/L)、中性粒细胞弹性蛋白酶(10nmol/L)、蛋白酶3(200nmol/L),猪胰弹性蛋白酶(10nrilol/L),牛α-胰糜蛋白酶(1nmol/L)的蛋白酶活性抑制率分别为60.89%、82.84%、21.21%、58.32%、96.98%,但对人纤溶酶、胰蛋白酶及猪胰蛋白酶抑制活性较弱。rTrSerpinl对人组织蛋白酶G及中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制常数(Ki)分别为(949.80±91.51)、(242.70±53.41)nmol/L。结论rTtSerpinl对多种丝氨酸蛋白酶具有较强抑制作用。

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中国寄生虫学与寄生虫病

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