Toll样受体4诱导感染微小隐孢子虫的小鼠树突状细胞功能的体外研究

作者：方芬; 刘喆; 王桂军; 徐前明微小隐孢子虫树突状细胞toll样受体4抗体成熟度黏附

摘要：目的 体外分析Toll样受体（TLR）4诱导感染微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）小鼠的树突状细胞（DC）功能。方法 纯化脱囊隐孢子虫经5（6）-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯标记隐孢子虫子孢子，PCR鉴定隐孢子虫种。制备小鼠骨髓源树突状细胞，培养至第7天，于培养板各孔中分别加入1 ml DC，TLR4抗体组加入1 ml脱囊标记的隐孢子虫子孢子（2 × 10^5/孔）和0.5 ml TLR4抗体（终浓度为1 μg/ml），感染组加入脱囊标记的隐孢子虫子孢子1 ml和0.5 ml RPMI 1640培养基，空白对照组加入1.5 ml RPMI 1640培养基。每组各3孔。培养2 h后，流式细胞术检测各组的CD11c^＋相对表达水平，Flowjo软件比较各组树突状细胞的成熟情况。感染后24 h，荧光显微镜观察各组隐孢子虫子孢子与树突状细胞的黏附情况。各组CD11c^＋相对表达水平间的差异采用χ^2检验。结果 纯化后的隐孢子虫经PCR扩增，获得长度为830 bp的条带，鉴定为微小隐孢子虫。流式细胞术检测结果显示，TLR4抗体组和感染组的树突状细胞CD11c^＋相对表达水平分别为67.67 ± 1.80和83.37 ± 3.73，与空白对照组（7.06 ± 0.02）比较，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）；TLR4抗体组与感染组间差异也有统计学意义（P 〈 0.05）。Flowjo软件分析结果显示，TLR4抗体组的CD11c^＋相对表达水平的峰值低于感染组，表明TLR4抗体组DC的成熟度低于感染组。荧光显微镜观察发现，TLR4组和感染组的隐孢子虫子孢子均可与树突状细胞发生黏附现象。结论 TLR4可诱导感染隐孢子虫小鼠的DC成熟。

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