环介导等温扩增法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果评估

作者：冯婷; 秦志强; 许静; 周杰; 钱颖骏; 祝红...日本血吸虫虫卵核酸环介导等温扩增效果评估

摘要：目的 评估环介导等温扩增（loop mediated isothermal amplification，LAMP）法检测粪样中日本血吸虫（Schistosoma japonicum）虫卵DNA的效果，并评价其检测流行区现场牛野外粪样的效果。 方法 取1 g新鲜的日本血吸虫虫卵阴性牛粪，分别加入5个新鲜日本血吸虫虫卵、50 μl日本血吸虫虫卵排泄分泌产物（egg secretion product，ESP）制备人工模拟阳性粪样。用粪DNA提取试剂盒分别提取加入虫卵的未经研磨或研磨 2 min后的人工模拟阳性粪样、加入虫卵ESP的粪样和阴性粪样的DNA，以日本血吸虫28S核糖体 DNA （rDNA）为检测靶基因，用LAMP法、PCR法检测，评估LAMP法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果。收集2012-2014年湖南、湖北、江西、安徽等4省日本血吸虫病流行区的牛野外粪样221份，研磨后同法提取DNA，用LAMP法检测，并与PCR法、孵化法的检测结果进行比较，评价其检测流行区现场野外粪样的效果。 结果 LAMP法检测加入虫卵粪样并经研磨后提取的DNA、加入虫卵ESP粪样提取的DNA均为阳性反应，呈绿色；而加入虫卵粪样未经研磨提取的DNA、阴性粪样DNA则为阴性反应，呈棕色；PCR检测的结果与LAMP法检测结果相近。LAMP法、PCR法和孵化法检测血吸虫病流行区牛野外粪样的阳性率分别为5.43%（12/221）、4.52%（10/221）、0.90%（2/221）。LAMP法的阳性率明显高于孵化法（P ＜ 0.05），LAMP法与PCR法阳性率差异无统计学意义 （P 〉 0.05）。 结论 LAMP法可用于检测流行区现场野外粪样的日本血吸虫虫卵DNA，其现场应用价值有待进一步验证。

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