作者:李芳芳 郭永 崔芳芳 丁宁 张嵘 邹检平脆性x综合征fmrp重组表达蛋白纯化
摘要:目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白。方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMRl基因后将其克隆至融合表达载体pGEX-6P-1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,并用IPTG进行诱导表达。应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST—FMRP融合蛋白,并以SDS—PAGE电泳和Western blot对融合蛋白的表达进行检测。结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Western blot鉴定为GST—FMRP融合蛋白。结论:大肠杆菌中FMRP IS010的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础。
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