作者：莫毅 梁方方 檀大羡 牛向丽 陈自洪 华荣 ...卵泡抑素真核表达载体基因转染绿色荧光蛋白
摘要：目的：体外构建携带人卵泡抑素基因（FS）cDNA的真核表达载体,并观察其在幼年叙利亚地鼠肾细胞（BHK21）中的表达。方法：从新鲜人卵泡抽提液细胞中提取RNA,应用RT-PCR方法扩增人FScDNA序列,克隆到pMD-18T载体中,构成pMD-FS重组克隆质粒。经测序鉴定后,双酶切得到人FS基因cDNA序列,插入到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-FS重组表达质粒。pEGFP-FS重组表达质粒经酶切和PCR鉴定,通过脂质体2000介导瞬时转染BHK21细胞,并检测绿色荧光蛋白（GFP）的荧光表达。结果：成功构建pMD-FS重组克隆质粒,FScDNA序列测序结果与GenBank中公布的序列（Genbank NM_013409.1）同源性为100%;成功构建pEGFP-FS重组表达质粒,将其转染BHK21细胞后,观察到绿色荧光蛋白的表达。结论：本实验成功构建了人FS的pMD-FS重组克隆质粒和pEGFP-FS重组表达质粒,为进一步研究FS对哺乳动物卵泡发育的影响奠定了基础。
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