大型成年哺乳类动物绵羊阴道平滑肌细胞的原代培养改进方法研究

作者：李玢; 于翠革; 李连香; 姜向阳; 刘晓英; ...盆腔器官脱垂阴道平滑肌细胞原代培养动物模型

摘要：目的探索原代培养成年大型哺乳动物绵羊阴道平滑肌细胞（vaginal smooth muscle cells,VSMC）改良方法。方法成年绵羊阴道平滑肌取材,利用预消化组织块法（将组织剪碎呈1 mm3大小组织块,0.1%Ⅰ型胶原酶消化20 min,0.1%胰酶-EDTA与0.1%Ⅰ型胶原酶混合溶液再次消化30 min,将组织块种于培养瓶）原代培养VSMC,并与传统组织块法和酶消化法进行细胞萌出速度及增殖速度比较,提高VSMC原代培养效率;免疫荧光染色法和western bloting法检测平滑肌细胞标志物calponin及a-SMA表达鉴定VSMC。结果预消化组织块法获得原代VSMC速度快于传统组织块法和酶消化法,3 d可见细胞萌出,9 d可达80%细胞融合,＂峰谷＂特征明显,而酶消化法至12 d增殖至80%细胞汇合,传统组织块法约7 d可见细胞萌出,14 d可达80%细胞汇合;VSMC平滑肌标志物calponin和a-SMA均呈阳性表达（P〈0.05）;VSMC可扩增代数有限,扩增7代后即表现出细胞形态改变,增殖缓慢,胞核内出现空泡,死亡细胞增加等表现。结论预消化组织块法可较快速多量获得绵羊VSMC。

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