作者：张鸿晖; 谢斌辉hbxmicro肝卵圆细胞大肠埃希菌dh5a质粒载体p
摘要：目的 研究构建可以稳定表达HBx和Micro RNA-21基因的肝卵圆细胞株的方法 。方法 采用LE培养基培养大鼠卵圆细胞株（LE/6）,以质粒Pc DNA3.1-HBVx中的HBVx序列为模板,PCR法扩增得到目的基因片段A。将HBx目的基因片段和质粒载体p EGFP-Nl进行双酶切,线性化得到重组质粒命名为p EGFP-HBx。重组质粒转化感受态大肠埃希菌DH5a,并进行筛选培养。用脂质体法将质粒转染卵圆细胞,作为p EGFP-HBx组;用脂质体法将质粒转染质粒载体p EGFP-Nl,作为p EGFP-NI质粒组。最后将Pre-Micro RNA-21与HBx-LE/6共培养,培养24 h后用荧光显微镜观察转染细胞的荧光表达情况。结果 p EGFP-HBx中GFP表达量经荧光定量PCR仪器确定为92.28%,且表达程度强;Pre-Micro RNA-21与HBx-LE/6共培养完成后,p EGFP-HBx组内Micro RNA-21的转录水平经仪器测量为1.77±0.24,显著高于p EGFP-NI质粒组内的0.36±0.21,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 本研究成功地构建了稳定表达HBx和Micro RNA-21基因肝卵圆细胞株,为进一步研究HBx蛋白、mi RNA-21、肝卵圆细胞与肝癌之间的关系提供了实验基础。
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