作者：凌鸿; 曾旭; 郭顺星lea2race表达抗盐胁迫
摘要：晚期胚胎富集蛋白（late embryogenesis abundant proteins,LEA）是一种亲水、热稳定性蛋白,与植物抗逆性密切相关,研究LEA家族基因对铁皮石斛抗逆性研究具有重要意义。本研究以铁皮石斛（Dendrobium officinale）种子为材料,采用RACE技术获得全长cDNA,命名为DoLEA2（Gen Bank登录号：KY626329）。该基因全长cDNA为1 224 bp,编码313个氨基酸,具有晚期胚胎富集蛋白（LEA_2）结构域和水分胁迫高敏感响应结构域,所编码蛋白与其他物种LEA2蛋白具有较高相似性,在进化上与单子叶植物聚为一支,且与蝴蝶兰（Phalaenopsis aphrodite）亲缘关系最近。铁皮石斛DoLEA2在叶的表达量最高,根和茎次之。该基因在Escherichia coli BL21（DE3）中能够高效表达,其优化表达条件为：37℃添加终浓度0.5 mmol·L~（-1）的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导4 h。盐胁迫条件下与对照组相比,重组pET28a-DoLEA2菌株表现出较好的耐盐性。本研究首次获得了铁皮石斛LEA2全长cDNA序列,验证了其耐盐胁迫功能,为进一步研究铁皮石斛抗逆性分子机制提供科学依据。
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