作者：严春霞; 闻人庆; 陆伟宏; 何国产一步法dna提取肺炎支原体
摘要：目的 探究建立肺炎支原体（Mp）基因组DNA一步提取方法,应用于显色肺炎支原体环介导等温扩增（LAMP）体系,以期研制出高灵敏度和高特异度肺炎支原体的检测方法。方法 分别用5种方法提取肺炎支原体培养液基因组DNA,并分别从Mp DNA的纯度、产量、操作步骤、仪器设备和提取时间方面进行比较; 最后将5种方法提取的基因组DNA同时应用于已建立的可视化LAMP体系检验提取效果; 选取2016年1月～3月20例支原体肺炎住院患儿的咽拭子标本,并用改良后的ROSE法提取咽拭子标本,并鉴定提取效果。结果 提取纯度上,ROSE法和其他四种方法进行两两比较,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）,即ROSE法略好于碱裂解法和煮沸法,但低于CTAB法和试剂盒法; 产量上,ROSE法和其他四种方法进行两两比较的结果是：和煮沸法比差异无统计学意义（q=0.95,P〉0.05）,和其他三种方法比差异有统计学意义（P均〈0.05）,因此ROSE法提取的产量要高于碱裂解法、CTAB法和试剂盒法; 在仪器设备、操作步骤和提取时间上ROSE法、碱裂解法和煮沸法优于CTAB法和试剂盒法; 5种方法提取的DNA均能应用于LAMP反应,除煮沸法外,其余四种方法结果无明显差异。结论 该研究建立了肺炎支原体一步法基因组DNA提取方法,成功应用于显色Mp LAMP体系中,真正实现不需要任何贵重仪器即可检测肺炎支原体。
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