红莲型杂交水稻细菌双杂交系统文库的构建

作者：王坤 胡骏 彭晓珏 李绍清 朱英国水稻幼穗细菌双杂交系统文库构建

摘要：用Trizol试剂提取红莲型水稻杂种F1幼穗的总RNA，分离纯化mRNA后反转录并合成双链cDNA．经Sephrose CL-2B凝胶过滤柱层析后，收集大于400bp以上的双链cDN段，将其连接到pTRG载体上，转化到XL1-Blue MRF’Kan感受态细胞后构建成红莲水稻幼穗细菌双杂交文库．经检测计算该原始文库容量为1．03×10^6 pfu／mL，对随机挑取的100个克隆进行PCR鉴定显示重组率接近100％而且大于800bp的插入片段达到97％．扩增后文库的容量达到1．05×10^10pfu／mL．

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