猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

作者：方改霞 温国元 罗雪莲 凌大伟 潘兹书猪瘟病毒多克隆抗体

摘要：以猪瘟病毒（CSFV）石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板，PCR扩增CSFV ns3基因N末端截短的cDN段．PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后，克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体，构建重组质粒pET-△NS3，转化E．coli BL21-codonPlus（DE3），IPTG诱导重组蛋白表达．采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3（NS3）重组蛋白，免疫家兔，制备多克隆抗体．ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示，该多克隆抗体效价在1×10^5以上，能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应．制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原；NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定．

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社