作者：闫丽; 张瑶楠; 张蔚; 陈娟; 高丽娜; 陆彩...精浆mirnas实时定量pcr
摘要：目的优化精浆miRNAs提纯方法,为后续实验奠定基础。方法收集国家卫生计生委科研所生殖健康服务中心正常精液样本5例,非梗阻性无精子症（NOA）患者（经北京大学第三医院检查确诊）精液样本22例。根据不同RNA提取方法分为4组：Trizol LS组、蛋白酶K＋Trizol LS组、miRNeasy Micro kit组及Trizol LS＋miRNeasy Micro kit联合使用组（改良组）。比较4组提纯NOA患者精浆RNA的OD260/280,使用Agilent2100生物分析仪检测改良法提纯精浆miRNAs的纯度和质量,采用实时定量PCR方法比较4组精浆miR-106b的溶解曲线,并比较精液参数正常组（n=5）和NOA患者组（n=10）精液样本中的miR-106b的表达量。结果改良组提纯精浆RNA的OD260/280为（1.90±0.03）显著高于其他3组（P〈0.05）;改良组提纯精浆miRNAs的完整数合格,色谱图位置特异性明显,峰值清晰;4组miR-106b的溶解曲线中,改良组曲线符合标准;NOA患者精浆中miR-106b的表达丰度显著低于参数正常组（P〈0.01）。结论Trizol LS与miRNeasy Micro kit联合使用提纯的精浆miRNAs质量好,能满足后续实时定量PCR、深度测序等实验要求。小样本分析发现NOA患者精浆miR-106b含量显著低于精液参数正常组,有待大样本验证其是否能作为临床诊断NOA的分子指标。
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