作者：李媛媛; 张瑶楠; 闫丽; 贾孟春; 刘美玲speedya基因rna干扰精子发生
摘要：目的 建立基于Tet-On系统诱导表达的Speedy A基因RNA干扰转基因小鼠模型,探讨Tet-On系统在研究精子发生相关基因中的应用,研究Speedy A基因下调对精子发生的影响。方法 体外实验筛选下调Speedy A基因表达的有效干扰片段,Gateway技术构建包含有效干扰片段和四环素反应元件（TRE）的质粒（pRP.EX2d-TRE〉shSpdya）,受精卵显微注射该质粒建立转基因小鼠并筛选到纯合子,然后与四环素调控的反式激活子（rtTA）转基因小鼠杂交,筛选TRE和rtTA双阳性的小鼠为四环素诱导的Speedy A-RNA干扰转基因小鼠模型,喂食强力霉素（Dox）诱导RNA干扰片段的表达下调Speedy A基因的表达;实时荧光定量PCR法检测模型组小鼠与喂食强力霉素的正常小鼠（对照组）Speedy A的表达差异;HE染色观察睾丸组织形态学变化,TUNEL法检测小鼠睾丸组织的细胞凋亡情况。结果 模型组小鼠Speedy A基因的表达量与对照组小鼠的表达量相比下降26%;模型组小鼠睾丸组织发生异常的生精细胞凋亡。结论成功建立了基于Tet-On系统诱导表达的可控性Speedy A-RNA干扰转基因小鼠模型,说明可以基于Tet-On系统在体研究精子发生相关基因的功能;Speedy A基因表达下调可使生精细胞发生异常凋亡。
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