作者：许观照 张丽红 王时灿 张伟 王琳琳 张琦 ...人类精子dna碎片冷冻保存上游法处理技术精子染色质扩散实验
摘要：目的通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较，探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响。方法（1）精液常规检测正常的患者30例，手淫法取精，精液液化混匀后分4份，分别用于精子染色质扩散（SCD）实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验（不加保护剂直接冻存的为冻存1组；添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组）；（2）上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态，一部分用于精子DNA完整性检测；（3）冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻，SCD实验检测精子DNA完整性；（4）冻存2组分别于第7天和第90天解冻，0．1ml用于精子DNA完整性检测，剩余精液应用上游法处理，检测上游处理前后精子DNA的完整性。结果（1）冻存1组中，冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[（25．6土7．3）％]显著高于冻存7d者[（22．4±7．4）％]（P〈0．05），且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[（20．6±7．3）％]（P〈O．05）；冻存2组中，冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[（25．9±7．2）％VS．（23．6土7．8）％]（P〈O．05），且均显著高于新鲜精液（P〈0．05）；而冻存7d和90d后，两个冻存组间比较，精子DNA损伤率均无显著差异（P〉0．05）。（2）新鲜精液经上游法处理后，精子DNA损伤率由处理前的（20．6±7．3）％降为（6．4±2．5）％（P〈O．05）；冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后，精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为（9．38±2．8）％VS．（23．6±7．8）％和（9．7±2．6）％VS．（25．9±7．2）％]（P％0．05）。结论冻存对精子DNA有损伤，冻存时间对于精子DNA完整性有影响。不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异。不论是新鲜精液还
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