作者：黄品秀 李蓉 林洪波 赵善飞 刘波澜胚胎植入遗传学卵母细胞rbl甲基化
摘要：目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态，旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用，为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础。方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞FGV期（生殖泡期）、MI期（第一次减数分裂中期）、MII期（第二次减数分裂中期）]中的mRNA表达，即细胞裂解后直接逆转录＋全转录扩增cDNA4-荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量。同时还进行DNA甲基化的研究：细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理，再进行半巢式PCR扩增出目的片段，把目的片段进行T载体（TA）克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态。结果RB1在小鼠GV期、MI期、MII期卵母细胞的表达量分别是：（0．054±0．004）、（0．080±0．005）、（0．101±0．005），RB1在MII期中的表达量约是GV期的2倍，差别具有统计学意义（P〈0．05）。RB1甲基化：MI期和MII期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T，所有CpG位点完全非甲基化。GV期偶见1-2个CpG位点甲基化，所有CpG位点基本完全非甲基化。结论RB1mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加，RB1DNA在卵母细胞（GV-MII）中尚未发生甲基化。
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