作者：高军 马芸 张仁礼 刘彩霞 周灿权rna干扰小分子干扰rna凋亡卵巢衰竭
摘要：目的为研发保护女性生殖细胞的小分子干扰RNA（siRNA）类药物，以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型，检测靶向凋亡关键基因酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的siRNA对HFF凋亡的抑制作用。方法设计合成三对靶向SMPDI基因的siRNA并体外转染HFF细胞，转染后48h用丝裂霉素（MMC）诱导细胞凋亡。荧光定量逆转录-聚合酶链反应（O-RT-PCR）法及免疫印迹（Western blot）检测siRNA转染后SMPD1在mRNA水平和蛋白水平的变化，Annexin V—PI双染检测细胞凋亡率。用脂质体（lipofectamine 2000）和无干扰siRNA（NT siRNA）作为对照。结果siRNA1、2、3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为（67．0±9．0）％、0％、（45．0±2．1）％，以siRNA1最高，蛋白水平的抑制也呈现相同变化。siR-NA1组细胞凋亡率为15．2％，明显低于MMC组（26．3％）。结论靶向SMPD1的siRNA可以抑制人包皮成纤维细胞凋亡。
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