作者：韩聚强; 杜静华; 徐小洁; 刘文鹏; 梁吉光...肝星状细胞原代培养细胞分离小鼠
摘要：目的：探索C57.BL/6J小鼠肝星状细胞（HSCs）分离、纯化的可行方案，并评价该法所得HSCs的生物学特性。方法：经肝门静脉，先用不含钙镁离子的D-Hanks液充分灌注肝脏，再以适宜浓度的链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶顺序灌注，随后Percoll非连续密度梯度离心分离、纯化HSCs，台盼蓝拒染法检测HSCs活性，光镜观察体外培养的HSCs的形态学变化，免疫细胞化学鉴定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和结蛋白的表达，Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果：纯化后每只小鼠获得HSCs约5.5×105个，纯度及存活率均大于95%；免疫细胞化学技术证实培养的HSCs分别表达α-SMA和结蛋白；Western印迹显示原代HSCs体外培养7d时，α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白的表达量达到峰值。结论：建立的分离、纯化方案可获得高纯度、高活率、功能正常的小鼠原代HSCs，为进一步研究肝纤维化的发病机制提供了技术保障。
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