作者：张丽娜; 黄映辉ec109细胞细胞定位
摘要：目的：构建GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1（G3BP1）的真核表达载体pEGFP-C3-G3BP1，并观察其在人食管癌EC109细胞中的表达及定位。方法：采用RT-PCR法从EC109细胞中扩增G3BP1cDNA全长序列，用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ双酶切PCR产物后克隆至pEGFP-C3载体，转化大肠杆菌DH5α后，挑取阳性克隆提取质粒，经双酶切及测序鉴定；将重组质粒用脂质体法转染EC109细胞，荧光定量RT-PCR和Western印迹检测G3BP1的表达，荧光显微镜观察G3BP1的定位。结果：目的基因G3BP1的序列完全正确，并在EC109细胞中获得表达，荧光显微镜观察显示G3BP1定位于细胞质。结论：构建了pEGFP-C3-G3BP1真核表达载体，并在EC109细胞中过表达，G3BP1蛋白定位于细胞质，形成应激颗粒（stress granules，SGs）。为进一步探讨G3BP1在食管癌细胞中的功能及其与SGs的相关性奠定了基础。
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