作者：张峥嵘; 王嫚娜; 梁剑青; 李世崇; 黄红艳...cd19基因克隆b细胞
摘要：目的：构建胞内段缺失的CD19蛋白截短体（CD19t）慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro，并建立稳定表达CD19t的人红白血病细胞系K562/CD19t。方法：合成CD19t基因全长，酶切产物插入慢病毒载体pLVXEF1α-IRES-Puro，将重组质粒转染293FT细胞包装病毒后感染人红白血病细胞系K562，采用Western印迹和免疫荧光技术检测CD19t在K562细胞中的表达，并通过ELISA检测K562/CD19t与CD19CAR-Jurkat共培养上清中的IL-2浓度。结果：酶切鉴定与测序结果表明成功构建慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro；Western印迹和免疫荧光检测到K562/CD19t细胞中CD19t的表达；ELISA结果显示表达的CD19t能够刺激识别CD19的CAR-Jurkat细胞分泌IL-2。结论：构建了CD19蛋白截短体慢病毒表达载体，并在K562细胞中表达,有助于进一步构建B细胞白血病动物模型和验证CAR-T效能。
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