作者：谢永华 王冠明 许秀秀肝细胞sv40t抗原慢病毒
摘要：目的 构建在肝细胞中特异性表达 SV40T抗原的表达载体并进行鉴定.方法 通过Gateway技术构建SV40T慢病毒载体pLV-Puro-ALB〉SV40T并通过菌落PCR筛选鉴定,将其与辅助质粒pLV-helper1、pLV-helpe2、pLV-helper3共转染293T细胞包装慢病毒并在荧光显微镜下进行滴度值测定.用SV40T慢病毒载体转染肝癌 HepG2细胞,并在荧光显微镜下行转染效率测定;实时荧光定量PCR检测转染细胞SV40T基因的表达水平.结果 Gateway技术构建的慢病毒载体pLV-Puro-ALB〉SV40T经鉴定完全正确;慢病毒包装 48 h 后视野下可见清晰绿色荧光表达,病毒滴度为1.73×108 TU/mL.慢病毒载体成功转染HepG2细胞,转染效率约70%,并通过RT-PCR检测SV40T表达水平明显升高.
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