作者：李香丹; 尹明姬; 杨洋; 林贞花; 咸哲民; ...癫痫托吡酯海马微小rna微小rna146a细胞凋亡含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8
摘要：目的观察托吡酯（TPM）腹腔注射后癫痫大鼠海马组织损伤改变,并探讨其可能机制。方法将40只大鼠依据随机数字表法分为正常组、模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组。模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组采用腹腔注射氯化锂180 mg/kg、匹罗卡品30 mg/kg制作癫痫模型。模型组、TPM低剂量组、TPM高剂量组大鼠分别于癫痫发作后5 h经腹腔注射生理盐水10 m L/（kg·d）、TPM 40 mg/（kg·d）、TPM 80 mg/（kg·d）。各组连续用药4周后处死大鼠取海马组织,HE染色观察大鼠海马组织病理变化;应用基因芯片技术筛选各组差异表达的miRNA,并用实时荧光定量PCR法进行验证;采用TUNEL法检测海马组织凋亡细胞,并计算凋亡细胞数;分别采用Western blotting法、免疫荧光法和免疫组化法检测各组大鼠海马组织中的Caspase-8。结果与正常组相比,模型组海马组织损伤明显,TPM低剂量组和TPM高剂量组海马组织损伤较模型组减轻,且TPM低剂量组损伤最轻。基因芯片检测发现模型组出现12个表达上调的miRNA和14个表达下调的miRNA,经实时荧光定量PCR验证,只有miR-146a在各组表达的差异有统计学意义。模型组、TPM高剂量组、TPM低剂量组、正常组海马组织中miR-146a相对表达量依次降低（P均〈0.05）。细胞凋亡检测发现,与正常组相比,模型组大鼠CA1区、CA3区和DG区凋亡细胞细胞数高于正常组（P均〈0.05）,而TPM高剂量组和TPM低剂量组凋亡细胞数低于模型组（P均〈0.05）。Western blotting结果显示,模型组Caspase-8蛋白相对表达量高于正常组,模型组、TPM高剂量组、TPM低剂量组Caspase-8蛋白相对表达量依次降低（P均〈0.01）。免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组大鼠CA1区、CA3区和DG区Caspase-8阳性细胞数高于正常组（P均〈0.05）,TPM高剂量组和TPM低剂量组Caspase-8阳性细胞数低于模型组（P均〈0.05）。免疫组化结果显示,模型
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