作者：唐传喜; 刘鑫峰; 李风; 高殿帅胶质瘤胶质母细胞瘤cue结构域蛋白2慢病毒
摘要：目的构建过表达CUE结构域蛋白2（CUEDC2）的人脑胶质瘤U251细胞系。方法 PCR扩增CUEDC2基因全长序列,将其连接于GV358载体质粒。酶切鉴定GV358-CUEDC后采用慢病毒包装三质粒系统（GV358-CUEDC2、Helper 1.0、Helper 2.0）转染293T细胞。转染48、72 h后收集病毒上清并感染U251细胞。将U251细胞分为空白对照组、过表达CUEDC2组、空载体组。空白对照组不进行感染操作,过表达CUEDC2组、空载体组分别感染GV358-CUEDC和GV-vector。流式筛选后采用实时荧光定量PCR法检测U251细胞中的CUEDC2 mRNA,采用Western blotting法检测CUEDC2蛋白。结果 GV358-CUEDC酶切结果显示在900 bp处有一条明显条带,CUEDC2测序结果与Gen Bank数据库比对完全一致。流式筛选感染GV358-CUEDC慢病毒的U251细胞,得到阳性率95%以上的U251细胞。U251细胞在感染GV358-CUEDC2及GV-vector病毒后荧光显微镜下均可见绿色荧光。空白对照组、空载体组、过表达CUEDC2组U251细胞中CUEDC2 mRNA相对表达量分别为5.290±0.663、0.823±0.059、1,CUEDC2蛋白相对表达量分别为0.48±0.020、0.51±0.015、0.92±0.150,过表达CUEDC2组CUEDC2 mRNA及蛋白相对表达量均高于空载体组和空白对照组（P均〈0.01）。结论成功构建了过表达CUEDC2的人脑胶质瘤U251细胞系。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
