黏着斑蛋白Supervillin的抗体制备及纯化

作者：张佟佟 钱积成 朱长军 董智雄supervillin抗体纯化

摘要：黏着斑蛋白Supervillin（SVIL）是一个细胞膜结合蛋白分子，定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究 SVIL蛋白分子在细胞内的功能，应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒 ｐＧＥＸＫＧＳＶＩＬＣ３０２和ｐＨＩＳ８ＳＶＩＬＣ３０２，并在细菌 ＢＬ２１（ＤＥ３）中用 ＩＰＴＧ分别诱导表达 ＧＳＴＳＶＩＬＣ３０２和 ＨＩＳＳＶＩＬＣ３０２融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化 ＧＳＴＳＶＩＬＣ３０２蛋白，然后免疫新西兰大白兔制备 ＳＶＩＬ多克隆抗体，并用 ＮｉＮＴＡ柱子结合 ＨＩＳＳＶＩＬＣ３０２蛋白，对其进行交联，纯化抗体。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ（ＷＢ）和 Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＩＦ）实验证明该抗体可以识别外源的 ＧＦＰＳＶＩＬ和内源的 ＳＶＩＬ蛋白，并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此ＳＶＩＬ多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度，为进一步研究黏着斑蛋白 ＳＶＩＬ在细胞内的功能奠定了坚实的基础。

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