RNA干扰沉默PID1基因在C2C12细胞中表达的研究

作者：杨伦 徐正刚 王慧 陈其美 陈伟 胡艳霞 石...小鼠pid1基因rna干扰表达载体

摘要：构建和筛选对PID1（phosphotyrosine interaction domain containing 1,PID1）基因有RNA干扰作用的PID1-shRNA表达载体。据小鼠PID1 cDNA序列,优化设计了4条shRNA及1条阴性干扰序列,插入pGPU6/GFP/Neo载体中,得到pGPU6/GFP/Neo-PID1-1、pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3、pGPU6/GFP/Neo-PID1-4和pGPU6/GFP/Neo-PID1-NC。干扰载体转染C2C12细胞,以RT-PCR和Western blot技术检测shRNA对C2C12细胞中PID1 mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明：靶向PID1基因的4个shRNA重组质粒载体经测序分析,其shRNA编码序列与预期设计的完全一致,经酶切鉴定和测序分析证实,靶向PID1基因的shRNA重组质粒载体构建成功。进一步将构建的4个表达载体分别转染C2C12细胞,24 h后细胞中PID1基因mRNA表达水平依次下调（23.58±1.87）%、（75.44±0.77）%、（70.52±0.41）%和（56.60±3.13）%。48 h后细胞中PID1蛋白表达水平依次降低（30.15±5.05）%、（71.86±4.85）%、（67.93±2.28）%和（56.81±2.01）%。所筛选出的pGPU6/GFP/Neo-PID1-2、pGPU6/GFP/Neo-PID1-3和pGPU6/GFP/Neo-PID1-4三个表达载体均能高效地抑制转染细胞PID1 mRNA和蛋白的表达,为进一步研究PID1基因的功能奠定了基础。

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