菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体构建及原核表达

作者：耿晓霞 王文超 侯丙凯菠菜叶绿体转化载体构建定点整合gfp基因

摘要：分析菠菜叶绿体基因组全序列，选用了rbcL基因和accD基因的间隔区作为外源基因的定点整合位点，并从菠菜叶绿体基因组中克隆了rbcL基因全长和aecD基因的5’端部分，长度分别为1956bp和1320bp。以这2个DN段作为同源重组片段，以烟草叶绿体基因的启动子Prm和终止子psbA3’控制外源基因的转录，构建了包含筛选标记基因aox／A基因（编码氨基糖苷－3’－腺苷酸转移酶，具有壮观霉素和链霉素抗性）和报告基因GFP（编码绿色荧光蛋白）的菠菜叶绿体基因组定点整合表达载体pRAGA。酶切结果显示构建正确。将该载体转化大肠杆菌，在激光扫描共聚焦显微镜下用488nm蓝光激发，发现大肠杆菌发出强烈的绿色荧光，而对照菌体没有荧光，表明G即基因在原核大肠杆菌中已经成功表达。实验结果说明构建的菠菜叶绿体定点整合表达载体pRAGA可以用于菠菜叶绿体转化．

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