反义核酸逆转Hep-2v细胞多药耐药的研究

作者：黄建民; 栾信庸抗药性多药咽肿瘤寡脱氧核糖核苷酸类反义

摘要：目的:探讨克服肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR)的有效方法.方法:用反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸(asODN)对Hep-2v细胞进行多药耐药(MDR)逆转实验,(1)将Hep-2细胞经长春新碱(VCR)筛选建立Hep-2v耐药细胞株为靶细胞;(2)针对mdr1 mRNA序列计算机辅助设计人工合成两个15mer反义寡聚脱氧核苷酸序列:asODNⅠ、Ⅱ,以硫代法修饰,其中序列Ⅰ和Ⅱ的作用位点相邻接,互补位点为MDR-mRNA的330～359碱基;(3)MDR逆转实验:两个反义序列分别或联合作用于Hep-2v细胞,MTT法测定反义核酸作用前后VCR对Hep-2v细胞IC50,比较其细胞毒作用;用流式细胞仪(FCM)检测反义核酸作用后各实验组细胞表面糖蛋白P-170的阳性率;RT-PCR法检测mdr1 mRNA表达水平.结果:两个反义核酸均使Hep-2v细胞的P-170阳性率下降,mdr1 mRNA水平低调,VCR对Hep-2v的细胞毒作用IC50从900nmol/L降至＜200nmol/L.结论:两个反义核酸用于Hep-2v的MDR均获得明显的逆转效果,序列Ⅰ+Ⅱ联合作用的效果更强,表明两个序列可能有协同作用.

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