作者：刘丽秋; 傅文; 韩润鸿; 王淑娟普罗布考嘌呤霉素足细胞他克莫司结合蛋白质类氧化性应激
摘要：目的观察普罗布考对氨基核苷嘌呤霉素（PAN）致小鼠永生化足细胞损伤模型哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及氧化应激水平的影响,探讨普罗布考的肾脏保护作用机制。方法 PAN刺激体外培养的足细胞24h,建立足细胞损伤模型。采用CCK-8方法检测不同浓度普罗布考作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。将足细胞随机分为正常组、PAN组（PAN 50mg/L）、普罗布考组（PAN 50mg/L＋普罗布考40μmol/L）,予以相应药物刺激24h。采用荧光酶标仪检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞中活性氧（ROS）水平的变化。采用荧光显微镜检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞荧光强度的变化。采用Western-blot方法检测各组足细胞mTOR蛋白表达水平。结果 CCK-8方法检测结果显示,PAN造成足细胞损伤后加入浓度为20、40、100μmol/L普罗布考均使足细胞活性上升,与0μmol/L普罗布考组比较,差异有显著性（F=1 959.00,P〈0.05）,其浓度为40μmol/L时作用最明显。荧光显微镜检测结果显示,PAN组足细胞内荧光强度增强。DCF荧光强度检测结果显示,PAN组细胞内ROS生成明显升高,与正常组比较,差异有显著性（F=33 525.19,P〈0.05）;普罗布考组ROS生成明显减少,与PAN组比较,差异有显著性（P〈0.05）。Western-blot方法检测结果显示,PAN可使mTOR表达水平明显升高,与正常组比较,差异有显著性（F=179.55,P〈0.05）;普罗布考40μmol/L共处理细胞后,mTOR表达水平下降,与PAN组比较,差异有显著性（P〈0.05）。结论普罗布考可通过下调PAN导致的mTOR激活,降低ROS生成,减轻氧化应激水平,从而抑制足细胞损伤。
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