作者：王娟 高美华 张蓓抗原cd59cd3真核表达载体jurkat细胞信号转导
摘要：目的前期构建的真核表达载体pSUPER—CD3ξRNAi和pSUPER—CD59RNAi在Jurkat细胞中稳定表达，研究CD59与CD3分子在T细胞活化信号转导中的相互作用，进一步探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pSUPER—CD3ξRNAi和pSUPER-CD59RNAi；脂质体法将两种载体分别转染Jur—kat细胞，经G418筛选建立稳定转染细胞系；RT-PCR技术检测转染后CD59和cD3ξ在mRNA水平的表达抑制效果；采用噻唑蓝比色法检测转染前后各组Jurkat细胞的增殖效应，WesternBlot技术检测各组细胞zAP一70酪氨酸磷酸化的水平，激光共聚焦扫描显微镜检测各组细胞内Ca”变化，ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素2（IL一2）的变化。结果重组载体转染后RT—PCR结果表明，转染pSUPER—CD3ξRNAi和pSUPER—CD59RNAi质粒的细胞组CD3℃分子和CD59分子的表达分别受到抑制。转染干扰质粒的细胞组细胞增殖能力、ZAP一70酪氨酸磷酸化水平、ca^2＋及IL一2水平均明显低于未转染组和空质粒组，差异有显著性（F一96．13～328．60，q=6．27～32．664，P％0．01）。结论CD59和CD3在T细胞活化信号转导中具有协同作用。
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