作者：张艳丽 张文卿 徐腾飞 吕锐 刘颖聚合酶链反应基因融合优化
摘要：目的利用SOE-PCR技术连接丙酮丁醇梭菌内源性β1,4-葡聚糖酶启动子和信号肽（eglAp）与重组人白细胞介素12（rhIL-12）序列,构建融合基因eglAp-rhIL-12;优化SOE-PCR反应中的主要条件,获得具有可重复性的SOE-PCR方法。方法通过PCR得到eglAp的3′端和rhIL-12的5′端重叠的两个基因序列;通过调整SOE-PCR体系中模板eglAp和rhIL-12的量及比例,得到目的产物;通过调整退火温度及引物量提高扩增产物特异性。结果当SOE-PCR满足以下条件时即可获得高纯度高丰度目的产物：25μL PCR反应体系中,eglAp和rhIL-12的两个模板量分别为5～10ng,摩尔比为5∶1（质量比1∶1）;在不加引物的情况下,退火温度设定为71℃,扩增3个循环,然后加入0.4μL引物（10μmol/L）,退火温度设定为61.3℃,扩增28个循环。结论 SOE-PCR成功的关键在于调整好模板的比例和浓度,即质量比1∶1,模板量不要少于5ng（25μL PCR体系）;若要获得高纯度高丰度的连接产物,则需要适当提高退火温度和减少引物量。
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