作者：王海燕 谭丽莉 江彩玉 葛银林树突细胞血管内皮生长因子rna干扰
摘要：目的探讨抑制MCF-7乳癌细胞血管内皮生长因子（VEGF）的表达对树突细胞（DC）免疫功能的影响。方法针对VEGF基因设计小干扰RNA（siRNA）,以脂质体转染法将siRNA导入乳癌细胞MCF-7,RT-PCR检测干扰VEGF基因后mRNA的表达,Western blotting法检测VEGF蛋白的表达,观察VEGF基因沉默效果。以MCF-7乳癌细胞的培养上清和干扰VEGF基因后MCF-7乳癌细胞培养上清液同时添加粒-单细胞集落刺激因子、白细胞介素-4、肿瘤坏死因子α培养正常异基因DC,利用MTT法和Hoechst33258检测DC刺激正常外周血T细胞增殖的能力及DC激发的细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性;ELISA法检测DC培养上清液中白细胞介素12（IL-12）及DC与外周血单个核细胞（PBMC）共同培养液中干扰素γ（IFN-γ）的含量。结果VEGF基因经siRNA处理24 h后,MCF-7乳癌细胞VEGF mRNA和蛋白的表达明显降低,其诱生的DC与MCF-7乳癌细胞培养上清液诱生的DC相比,siRNA处理DC刺激T淋巴细胞增殖能力、CTL杀伤活性以及DC分泌IL-12和协同刺激外周血PBMC分泌INF-γ的能力明显增强。结论siRNA可靶向抑制乳癌MCF-7细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清液对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低。
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