作者：张艳丽; 高美华; 王秋波基因cd59突变中国仓鼠卵巢细胞补体限制作用
摘要：目的建立表达人突变CD59的细胞模型，初步研究其活性。方法以正常的CD59基因全长cDNA序列为模板，应用重叠延伸PCR法产生突变使CD59糖基化基序K41-H44突变为K41-K42，产生突变CD59基因，将其克隆于pALTER质粒中，构建出重组真核表达载体。应用脂质体介导法，与pcDNA3质粒共转染中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，以G418筛选阳性克隆。应用免疫化学染色及Western blot方法进一步检测突变CD59分子在转染细胞膜表面的表达。通过荧光染料释放试验，对突变CD59蛋白糖基化前后的补体限制活性进行检测。结果筛选出的阳性克隆细胞膜表面有突变CD59分子表达。将细胞的裂解物进行Western blot检测证实，在相对分子质量20000处可见1条与CD59相当的蛋白带。表达有突变CD59分子的阳性克隆细胞染料释放率低于对照组，糖基化后染料释放率明显升高。结论成功地获得了表达人突变CD59分子的细胞株。
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