作者：王劭; 朱小丽; 朱晓琳; 陈少莺; 林锋强; ...猪核衣壳蛋白n基因原核表达
摘要：猪传染性胃肠炎（swine transmissible gastroenteritis，TGE）是一种高度接触性肠道传染病，是我国法定检疫的疫病。为研究福建省猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）核衣壳蛋白基因（N）的分子特征及其原核表达产物的抗原性，参照GenBank中的TGEV全基因序列，设计合成一对扩增TGEV福建（FJ）分离株Ⅳ基因的特异性引物，进行克隆和序列分析，结果表明，TGEV-FJ株Ⅳ基因全长1149bp，编码382个氨基酸（GenBank登录号JQ700302），与国内外23株TGEVN基因的核苷酸同源性，氨基酸同源性进行比较分析，N基因核苷酸的同源性为95．4％～99．8％，氨基酸同源性为96．1％～100％。TGEV．FJ株Ⅳ基因克隆至原核表达载体pET-32a中，并转化到大肠杆菌（Escherichia coli）Rosetta（DE3）中进行表达。SDS—PAGE分析表明，重组蛋白约为68kD，与预期分子量一致；Westemblot分析表明，重组蛋白能与抗TGEV阳性血清反应出现特异性条带；以纯化的重组TGEVN蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性，送检20份猪（Susscrofa）TGEV阳性血清样本中检出16份阳性结果、10份阴性血清样本中检出9份阴性结果。利用纯化的TGEV重组N蛋白免疫Balb／c小鼠，杂交瘤技术制备单克隆抗体，获得了1株特异性好并能稳定分泌抗TGEVN蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为1-27），间接免疫荧光试验证明，该单抗能特异性识别TGEV全病毒抗原。TGEVN蛋白的单克隆抗体制备为建立TGEV免疫学检测方法提供了基础资料。
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