作者：赵平; 周慧; 张曼液相色谱法串联质谱法
摘要：目的 建立一种检测血清25-羟维生素D2[25(OH)D2]和25-羟维生素D3[25(OH)D3]的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)方法,以用于常规临床评价维生素D水平。方法 以稳定同位素标记的25(OH)D2-d3和25(OH)D3-d3作内标,血清标本和标准品采用饱和硫酸锌和乙腈沉淀血清蛋白,正己烷提取。采用HPLC-MS/MS技术进行分析,固定相为Poroshell 120EC-C18正向柱,电喷雾离子源(ESI),多反应监测模式(MRM),干燥气温为275℃,干燥气流为10L/min,喷雾器压力为50psi,毛细管电压为5 000V。以甲醇(80%)和超纯水(20%)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5mL/min,柱温为50℃,质谱采用高温ESI,以选择反应监测模式进行定量分析。结果 25(OH)D2和25(OH)D3内标峰面积比与对应的水平线性相关系数均大于0.995,检出限(LOD)均为1.0ng/mL,定量限(LOQ)分别为2.0ng/mL和1.5ng/mL,25(OH)D2批内和总变异系数分别为3.01%~5.23%和3.45%~8.72%,25(OH)D3批内和总变异系数分别为1.78%~3.43%和2.19%~4.16%,准确度分别为105.4%和98.0%~104.9%,加样回收率分别为99.67%~103.92%和98.72%~104.04%。结论 本研究建立的HPLC-MS/MS方法检测血清中25(OH)D2和25(OH)D3灵敏度高,准确性好,可用于常规临床评价维生素D含量。
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